• Язык
 

Культура животных клеток: практическое руководство

ISBN: 978-5-00101-557-4

Москва: Лаборатория знаний, 2018

Объем (стр):791

Дополнительная информация:4-е изд., испр. и доп. (эл.)

 

Постраничный просмотр для данной книги Вам недоступен.

Аннотация

Учебное издание, написанное ведущим специалистом в данной области, содержит наиболее полное описание теоретических основ и практических приемов работы с культурами животных клеток, а также необходимого оборудования, включая лабораторный дизайн. В достаточном объеме освещены вопросы техники безопасности. Подробно обсуждаются методика подготовки сред, приемы работы с первичной культурой и клеточными линиями. Описано специальное оборудование, в том числе для манипуляций с культурами животных клеток. Книга прекрасно иллюстрирована и удобна для использования как практическое руководство в лаборатории.
Для студентов-биологов, биотехнологов, медиков, а также исследователей, специалистов биофармацевтических центров и сотрудников диагностических лабораторий.

Содержание

Список иллюстраций 16
Список цветных вклеек 19
Список протоколов 20
Список таблиц 22
Предисловие и благодарности 24
Список сокращений 26
Глава 1. ВВЕДЕНИЕ 30
1.1. Исторические сведения 30
1.2. Преимущества культуры ткани 35
1.3. Ограничения 36
1.3.5. Нестабильность 38
1.4. Основные отличия культуры in vitro 38
1.5. Типы культуры ткани 38
Глава 2. БИОЛОГИЯ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК 41
2.1. Влияние окружающей среды на культуру клеток 41
2.2. Клеточная адгезия 41
2.3. Клеточная пролиферация 45
2.4. Дифференцировка 46
2.6. Энергетический метаболизм 51
2.7. Происхождение культивируемых клеток 51
Глава 3. СТРУКТУРА, ПЛАНИРОВКА И ОБОРУДОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ПОМЕЩЕНИЙ 56
3.1. Планировка, меблировка и оборудование 56
3.2. Планировка 61
Глава 4. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ 70
4.1. Потребности лаборатории культуры ткани 70
4.2. Асептическая зона 70
4.3. Инкубация и культура 80
4.4. Препаративные работы и стерилизация 83
4.5. Хранение 88
4.6. Дополнительное лабораторное оборудование 89
4.7. Специальное оборудование 90
Глава 5. МЕТОДЫ АСЕПТИКИ 91
5.1. Цели асептики 91
5.2. Элементы асептического окружения 91
5.3. Стерильные манипуляции 97
5.4. Стандартная процедура 99
5.5. Приборы и оборудование 104
Глава 6. БЕЗОПАСНОСТЬ, БИОЭТИКА И ВАЛИДАЦИЯ 105
6.1. Лабораторная безопасность 105
6.2. Оценка риска 105
6.3. Стандартные рабочие процедуры 107
6.4. Контроль безопасности 107
6.5. Общая безопасность 107
6.6. Пожар 112
6.7. Ионизирующее излучение 112
6.9. Биоэтика 120
6.10. Обеспечение качества 121
6.11. Валидация 122
Глава 7. ПОСУДА И СУБСТРАТЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК 124
7.1. Субстрат 124
7.2. Обработка поверхности 125
7.3. Выбор культуральных сосудов 127
7.4. Специализированные системы 133
Глава 8. СРЕДЫ И ДОБАВКИ 135
8.1. Составление сред 135
8.2. Физико-химические свойства 135
8.3. Сбалансированные солевые растворы 142
8.4. Полная среда 142
8.5. Сыворотка 145
8.6. Выбор среды и сыворотки 146
8.7. Другие добавки 149
Глава 9. БЕССЫВОРОТОЧНЫЕ СРЕДЫ 150
9.1. Недостатки сыворотки 150
9.2. Преимущества бессывороточных сред 154
9.3. Недостатки бессывороточных сред 156
9.4. Замена сыворотки 156
9.5. Выбор бессывороточной среды 158
9.6. Разработка бессывороточной среды 165
9.7. Приготовление бессывороточной среды 165
9.8. Среда, не содержащая животных белков 166
9.9. Заключение 166
Глава 10. ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЕ РАБОТЫ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ 167
10.1. Приготовление реактивов и материалов 167
10.2. Стерилизация оборудования и жидкостей 167
10.3. Оборудование 168
10.4. Реагенты и среды 178
10.5. Стерилизация среды 185
10.6. Контроль, проверка качества и хранение сред 196
Глава 11. ПЕРВИЧНАЯ КУЛЬТУРА 199
11.1. Инициация первичной культуры клеток 199
11.2. Выделение образцов ткани 200
11.3. Типы первичной культуры 206
Глава 12. СУБКУЛЬТУРА И КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ 223
12.1. Субкультивирование 223
12.2. Выбор клеточной линии 229
12.3. Обычный порядок поддержания культуры 230
12.4. Субкультивирование 233
Глава 13. КЛОНИРОВАНИЕ И СЕЛЕКЦИЯ 244
13.1. Клонирование клеток 244
13.2. Стимуляция эффективности посева 247
13.3. Суспензионное клонирование 251
13.4. Выделение клонов 255
13.5. Получение репликативных колоний 258
13.6. Селективные ингибиторы 259
13.7. Выделение генетических вариантов 259
13.8. Взаимодействие с субстратом 261
Глава 14. РАЗДЕЛЕНИЕ КЛЕТОК 263
14.1. Плотность клеток и изопикническая седиментация 263
14.2. Размер клеток и скорость седиментации 266
14.3. Методы, основанные на применении антител 266
14.4. Флуоресцентно-активируемый клеточный сортинг 270
14.5. Другие методы 272
14.6. Подходы для начинающих к освоению клеточного сортинга 273
Глава 15. ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОК 274
15.1. Необходимость характеристики 274
15.2. Аутентификация 274
15.3. Ведение документации и происхождение клеток 275
15.4. Параметры характеристики 275
15.5. Морфология клеток 278
15.6. Конфокальная микроскопия 289
15.7. Хромосомный состав 290
15.8. Анализ ДНК 293
15.9. Рнк и экспрессия белка 298
15.10. Активность ферментов 298
15.11. Антигенные маркеры 303
15.12. Дифференцировка 306
Глава 16. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА 307
16.1. Экспрессия фенотипа in vivo 307
16.1.2. Линейная селекция 307
16.2. Стадии дифференцировки 307
16.3. Пролиферация и дифференцировка 308
16.4. Коммитирование и линии дифференцировки 308
16.5. Пластичность стволовых клеток 309
16.6. Маркеры дифференцировки 310
16.7. Индукция дифференцировки 311
16.7.5. Давление кислорода 316
16.8. Дифференцировка и злокачественность 317
16.9. Практические аспекты 317
Глава 17. ТРАНСФОРМАЦИЯ И ИММОРТАЛИЗАЦИЯ 318
17.1. Роль в характеристике клеточных линий 318
17.2. Что такое трансформация? 318
17.3. Генетическая нестабильность и гетерогенность 318
17.4. Иммортализация 321
17.5. Аберрантный контроль роста 329
17.6. Туморогенность 332
Глава 18. КОНТАМИНАЦИЯ 338
18.1. Источники контаминации 338
18.2. Виды микробной контаминации 342
18.3. Контроль контаминации 342
18.4. Уничтожение контаминированных культур 350
18.5. Устранение контаминации 350
18.6. Перекрестная контаминация 354
18.7. Заключение 354
Глава 19. КРИОКОНСЕРВАЦИЯ 355
19.1. Предпосылки метода замораживания 355
19.2. Подготовка к криоконсервации 355
19.3. Принципы криоконсервации 356
19.4. Витрификация 367
19.5. Дизайн и контроль замороженных запасов 369
19.6. Банки клеток 370
19.7. Транспортировка клеточных культур 371
Глава 20. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ 373
20.1. Подсчет клеток 373
20.2. Вес клеток 381
20.3. Содержание ДНК 382
20.4. Белок 382
20.5. Скорость синтеза 384
20.6. Приготовление образцов для ферментного и иммуноферментного анализа 386
20.7. Цитометрия 386
20.8. Репликация образцов 386
20.9. Клеточная пролиферация 387
20.10. Эффективность культивирования 396
20.11. Индекс мечения 399
20.12. Время клеточного цикла 402
20.13. Миграция клеток 402
Глава 21. ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ 403
21.1. Жизнеспособность, токсичность и выживаемость 403
21.2. Ограничения in vitro 404
21.3. Характер исследований 404
21.4. Применение исследования цитотоксичности 415
21.5. Генотоксичность 416
21.6. Воспаление 419
Глава 22. КУЛЬТУРЫ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК 420
22.1. Клеточные культуры специализированных клеток 420
22.2. Эпителиальные клетки 422
22.3. Мезенхимальные клетки 445
22.4. Нейроэктодермальные клетки 459
22.5. Гематопоэтические клетки 467
22.6. Гонады 469
Глава 23. СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ, ГАМЕТЫ И АМНИОЦИТЫ 470
23.1. Стволовые клетки 470
23.2. Половые клетки 481
23.3. Экстраэмбриональные клетки 481
Глава 24. КУЛЬТУРА ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК 499
24.1. Проблемы культивирования опухолевых клеток 499
24.2. Получение образцов 500
24.3. Дезагрегация 501
24.4. Первичная культура 501
24.5. Селективная культура опухолевых клеток 502
24.6. Размножение клеточных линий 505
24.7. Характеристика культур опухолевых клеток 506
24.8. Специфические опухолевые культуры 507
Глава 25. ТРЕХМЕРНАЯ КУЛЬТУРА 516
25.1. Межклеточное взаимодействие и фенотипическая экспрессия 516
25.2. Органная культура 517
25.3. Гистотипическая культура 521
25.4. Органотипическая культура 529
25.5. Создание трехмерных изображений клеток (3D-реконструкций) 531
Глава 26. УВЕЛИЧЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВА КЛЕТОК И АВТОМАТИЗАЦИЯ 532
26.1. Увеличение производства суспензионных культур 532
26.2. Крупномасштабное производство монослойных культур 539
26.3. Управление процессом 547
26.4. Автоматизация 549
Глава 27. СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ 551
27.1. Методы подготовки и исследования лимфоцитов 551
27.2. Авторадиография 552
27.3. Съемка в режиме замедленного времени 557
27.4. Синхронизация клеток 559
27.5. Культуры клеток пойкилотермных животных 559
27.6. СЛИЯНИЕ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК 561
27.7. Продукция моноклональных антител 563
Глава 28. ТРЕНИРОВОЧНЫЕ ПРОГРАММЫ 567
28.1. Цели и задачи главы 567
28.2. Навыки препаративных работ и обращения с оборудованием 567
28.3. Основные методы работы с культурой клеток 577
28.4. Упражнения повышенной сложности 595
28.5. Специализированные упражнения 606
Глава 29. РЕШЕНИЕ ПРОБЛЕМ 607
29.1. Аномальный внешний вид клеток 607
29.2. Медленный рост клеток 608
29.3. Среда 610
29.4. Субстраты и контейнеры 613
29.5. Микробиологическая контаминация 614
29.6. Химическое загрязнение 619
29.7. Первичная культура 620
29.8. Дифференцировка 622
29.9. Питание культуры 623
29.10. Субкультура 624
29.11. Клонирование 625
29.12. Перекрестная контаминация и неверная идентификация 627
29.13. Криоконсервация 628
29.14. Подсчет клеток 630
Глава 30. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 631
Приложение I. РАСЧЕТЫ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАКТИВОВ 632
Приложение II. ИСТОЧНИКИ ОБОРУДОВАНИЯ И МАТЕРИАЛОВ 640
Приложение III. КОМПАНИИ-ПОСТАВЩИКИ И ДРУГИЕ РЕСУРСЫ 664
Приложение IV. СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ [по Schaeff er, 1990] 677
Приложение V. КОНТАМИНИРОВАННЫЕ ИЛИ НЕПРАВИЛЬНО ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫЕ КЛЕТОЧНЫЕ ЛИНИИ 684
Приложение VI. ОСНОВНАЯ ЛИТЕРАТУРА 707
Список литературы 709
Предметный указатель 758

Рекомендации материалов по теме: нет